Videomicroscopie

Door lichtmicroscopie technieken te combineren met video-enhancement kan men dynamische processen zoals de beweging van organellen binnen levende cellen waarnemen.
Gedurende de video microscopie cursus die Prof. dr. I.K. Lichtscheidl [(Universiteit van Wenen) in het kader van een Europees samenwerkingsproject met de RU Nijmegen heeft gegeven, zijn bijzondere video en lichtmicroscopie technieken op tip-groeiende plantencellen gedemonsteerd (hier: Medicago sativa wortelharen en Amaryllis stuifmeelbuizen). Onderstaande -voor internet doelen helaas gecomprimeerde- real-time filmsequenties zijn verkregen door gebruik te maken van hoge numerieke apertuur optiek en monochromatisch licht (o.a. ultraviolet licht met kwarts optiek), en door achtergrondsbeeld correctie en analoog cq digitaal contrastverhoging toe te passen.
 
Techniek en object Voorbeeld
plaatje
Download filmpjes
Helderveld zonder achtergrondsaftrek
Links: bevroren beeld. Filmpje rechts: gekiemde stuifmeelkorrels waarin de lensvormige generatieve cel te onderscheiden is, gevolgd door zoom-opnamen over de beweging van organellen in de stuifmeelbuis (ongeveer 10 micrometer doorsnede)
Image bright field 46s; real-time
wmv (1137 kb)
mpg (4053 kb)
Video-Enhanced-Contrast (VEC)-helderveld
Door achtergrond beeldcorrectie (lees meer) en analoge plus digitale contrastversterking toe te passen kan men de aanwezigheid en beweging van kleine deeltjes, bijvoorbeeld organellen in de top van deze wortelhaar, in meer detail waarnemen. Filmpje rechts: Chaotische bewegingen zijn typich voor de extreme top van de cel terwijl gerichte bewegingen achter de top te zien zijn.
Image VEC 42s
wmv (1211 kb)
mpg (3780kb)
Fase-contrast
Niet alleen contrast maar ook halovorming rond deeltjes treedt op door fase-contrast microscopie. Met deze techniek is het moeilijk om aparte organellen in het dichte cytoplasma in deze celtop te onderscheiden, maar fase-contrast werkt heel mooi in een dun laagje cytoplasma (bijv. gevacuoliseerd celregio) op bacterien.
Image phase contrast 38s; real-time:
wmv (1066 kb)
mpg (3373 kb)
Differentieel Interferentie Contrast (DIC)
Deeltjes en objecten die in optische dichtheid verschillen verschijnen met een schaduw effect. Dankzij deze eigenschappen kan het traject van organellen (bijv. mitochondria) in levende cellen gevolgd worden, zoals in deze stuifmeelbuis
Image DIC 32s; real-time
wmv (803 kb)
mpg (2866 kb)
Donkerveld
Donkerveld microscopie is een ideale techniek voor het afbeelden van minuscule deeltjes (bijvoorbeeld goudbolletjes in labelingen, bacterien, oneffenheden in de celwand, zilverkorrels van in situ hybridizatie en aparte organellen). In deze stuifmeelbuis ziet men organellen verschijnen als heldere objecten op een donkere achtergrond
Image dark field 32s; real-time:
wmv (843 kb)
Ultraviolet
Deze opnamen zijn gemaakt met UV licht (370, 410, 440nm) dat niet voor direkt oogzicht geschikt is, maar dat wel gedetecteerd kan worden door een speciale video camera. Hiermee kunnen heel kleine deeltjes, waarschijnlijk Golgi blaasjes (ong. 300 nm groot) die een zeer snelle chaotische beweging uitvoeren, waargenomen worden tegen de plasmamembraan in de top van de stuifmeelbuis
Image ultraviolet microscopy 11s; real-time:
mpg (1600 kb)

 

Colofoon

Aanbevolen literatuur als rtf tekst of PDF document.

Deze beelden en filmpjes zijn auteurrechtelijk beschermd door de Radboud Universiteit Nijmegen regelingen; itt ander vcbio materiaal zijn ze "intellectueel" eigendom van het IECB To the IECB, University of Vienna

Prof. Dr. Irene Lichtscheidl
Cell Physiology and Scientific Film
"IECB = Institute of Ecology and Conservation Biology
University of Vienna (Austria)

http://www.vcbio.science.ru.nl/image-gallery/video/print/

laatst aangepast: 17 okt 2011