Bij diakinese (Gr. dia = uiteen; Gr. kinein = bewegen) ontwarren zich chromatiden die in een crossing-over waren. Doordat de chromatiden uit elkaar wijken zijn de chiasmata nu duidelijk te zien. Kernmembraan en nucleoli verdwijnen volledig. De spoelfiguur ontstaat: vanuit beide centrosomen (bij dierlijke cellen) aan de polen 'groeien' microtubuli. Sommige microtubuli verankeren zich aan de kinetochoren van de chromosomen hechten. Het verkorten en verdikken van de chromatiden zet zich voort.